• 应用纪要

使用Empower™样品组生成器自动创建用ACQUITY™ QDa检测器进行分析的色谱方法

使用Empower™样品组生成器自动创建用ACQUITY™ QDa检测器进行分析的色谱方法
  • Margaret Maziarz
  • Paul D. Rainville
  • Waters Corporation
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摘要

要优化离子源-质谱(MS)参数以增强信号，需要基于一系列电离变量创建多种色谱方法。本技术简报说明了使用Empower™样品组生成器软件自动创建色谱方法，并搭配ACQUITY QDa质谱检测器进行分析，从而研究探头温度和锥孔电压对盐酸美金刚灵敏度的影响。

优势

  • 使用Empower样品组生成器自动快速创建Empower仪器方法、方法组和样品组方法，同时改变色谱参数
  • 为Waters ACQUITY LC仪器、光学检测器和ACQUITY QDa质谱检测器生成色谱方法

简介

MS离子源电离参数的优化对于在液-质联用(LC-MS)中进行高灵敏度分析起着重要作用。通常研究电离参数（例如电离模式、锥孔电压或探头温度）以增强MS信号并达到目标分析物的低检测限。要研究不同电离参数及其范围对灵敏度的影响，需要基于一组变量仔细创建多种色谱方法。然而，手动创建和验证这些方法十分耗时且容易出错。

Empower样品组生成器(SSG)可自动创建仪器方法、方法组和样品组方法，同时更改色谱参数。根据实验设计，在样品组方法中自动创建和构造Empower方法组和仪器方法，作为准备运行的进样序列。自动创建色谱方法尽可能地减少了手动过程中可能出现的抄录错误和生成方法所花费的时间。

本技术简报说明了如何使用Empower SSG自动创建色谱方法，以联用ACQUITY QDa质谱检测器和Arc™ Premier系统进行分析。ACQUITY QDa用于检测无发色团的盐酸美金刚，这是一种常用于治疗与阿尔茨海默病相关的痴呆症的药物1。我们研究了QDa电离参数（探头温度和锥孔电压）对美金刚分析方法灵敏度的影响。

结果与讨论

盐酸美金刚缺乏UV检测所需的发色团，但使用ACQUITY QDa质谱检测器可产生稳定的MS信号2。表1中总结了本研究中使用的方法条件。使用浓度为1 mg/mL的甲醇浓缩储备液制备浓度为10 ng/mL的90:10水/甲醇标准溶液，并通过MS检测进行灵敏度研究。

盐酸美金刚的分析方法条件

系统：

Arc Premier系统、2998 PDA和ACQUITY QDa

色谱柱：

CORTECS™ C18+, 2.7 µm, 3 mm x 75 mm (P/N: 186007401)

柱温：

45 °C

流动相：

A：0.1%甲酸水溶液

B：0.1%甲酸的乙腈溶液

进样体积：

3.0 µL

MS检测：

ACQUITY QDa质谱检测器(Extended Performance)

•电离模式：ESI+

•单离子扫描(SIR)：180.2 Da

•探头温度：600 °C

•锥孔电压：15 V

•毛细管电压：0.8 kV

•数据：棒状图

清洗溶剂：

灌注/样品清洗液：50:50水/甲醇

密封清洗液：90:10水/乙腈

梯度表

按照下述步骤，使用Empower SSG自动创建色谱方法，以研究探头温度（600、500和400 °C）和锥孔电压（5、10、15和20 V）对盐酸美金刚灵敏度的影响。 

  • 将包含QDa变量的逗号分隔值(CSV)文件导入Empower SSG（图1）。实验设计包括MS条件与不同探头温度和锥孔电压的组合。
  • 从Empower项目加载一个基本样品组方法到Empower SSG，其中包括方法组和仪器方法以及分析的系统配置。
  • 研究因子探头温度和锥孔电压与Empower设置相关联（图2）。
  • 在最终生成样品组方法之前定义最终设置（进样组、平衡时间和方法名称）（图3）。

完成上述步骤后，Empower SSG根据实验设计自动创建样品组方法，作为准备运行的进样序列（图4）。Empower仪器方法和方法组会自动创建并内置于样品组方法中。样品组方法包括实验名称和12个具有不同探头温度和锥孔电压的方法组。按照用户的指示，在运行开始时添加平衡步骤和空白进样。如果没有Empower SSG，用户需要手动创建12个仪器方法和方法组，该过程耗时且容易出错。通过Empower SSG自动生成方法，可减少时间和抄录错误，确保所有色谱运行均按照正确创建的方法完成。使用ACQUITY QDa检测器采集的Empower数据如图5所示。实验运行中的峰数据表明，探头温度为600ºC和锥孔电压为15 V时，盐酸美金刚的灵敏度最高，产生的信噪比(s/n)值最高（图5A）。

图1.使用Empower SSG创建色谱方法。导入CSV文件(A)并查看实验设计(B)。
图2.Empower SSG。将因子或仪器变量与Empower设置相关联。
图3.Empower SSG生成方法的最终设置。
图4.使用Empower SSG生成的样品组方法。
图5.Empower数据。实验运行中的峰数据(A)和美金刚标准溶液的代表性色谱图(B)。

结论

使用Empower样品组生成器自动创建色谱方法，搭配ACQUITY QDa质谱检测器进行分析，从而研究电离参数（探头温度和锥孔电压）对盐酸美金刚灵敏度的影响。Empower仪器方法和方法组会自动创建，并内置于样品组方法中，作为准备运行的进样序列。自动生成方法可减少与手动过程相关的抄录错误和耗时。

Empower样品组生成器可自动创建色谱方法用于各种应用，包括在Waters ACQUITY液相色谱系统和检测器上执行的方法开发和验证。

参考资料

  1. https://www.webmd.com/drugs/2/drug-77932-377/memantine-oral/memantine-oral/details.
  2. Maziarz M, Wrona M, McCarthy SM.应用QDa质谱检测定量分析药片制剂中无发色团盐酸美金刚的优势.沃特世应用纪要, 720005179ZH, 2014.

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